目前,市面上僅有兩種新型的細菌內毒素檢測方法,分別是重組鱟試劑(rCR)和重組C因子(rFC)。
重組鱟試劑
重組鱟試劑(rCR)和重組C因子(rFC) 檢測方法的區(qū)別是什么?
1 反應原理
左側為重組鱟試劑(rCR) 右側為重組C因子(rFC)
2 檢測方法
01 重組鱟試劑(rCR)使用動態(tài)顯色法
重組鱟試劑(rCR)不需要更換方法和設備,使用現有的細菌內毒素檢測方法(動態(tài)顯色法)和設備就能進行檢測和分析。
PKF型細菌內毒素定量檢測系統
02 重組C因子(rFC)使用終點熒光法
重組C因子(rFC)以終點法定量測定熒光底物的單步酶促反應裂解產物來量化細菌內毒素,需要特定熒光酶標儀,經孵育后才可進行檢測。
3 復溶過程
01 重組鱟試劑(rCR)只需單步復溶
重組鱟試劑(rCR)只需單步復溶,檢測試劑用量50μL,完成檢測僅需15分鐘,既節(jié)省了檢測成本,又提高了檢測效率。
02 重組C因子(rFC)需預孵化
重組C因子(rFC)則較為復雜。檢測前,三種試劑酶溶液、緩沖液、底物溶解比例為 1:4:5,且必須經過預孵化步驟(過程不低于10分鐘),檢測試劑用量100μL,降低了檢測效率,檢測成本也大大增加。
4 檢測樣品
如圖所示,適合性/一致性研究測試了多個成品、水、緩沖液等樣品,得出重組鱟試劑(rCR)比重組C因子(rFC)有較低的不干擾稀釋倍數。
注:綠色的相對回收率表示有效的回收率,紅色的回收率是無效的(超出可接受范圍)
基于以上數據得出結論,重組鱟試劑(rCR)適合于廣泛的產品檢測。可比性研究測試了多種來源的細菌內毒素和水樣,證實應用重組鱟試劑(rCR)檢測具有較好的相對回收率。
5 總結
新的內毒素檢測方法已經是大勢所趨。從檢測原理、方法、前期準備、檢測樣品及檢測時間等方面來看,重組鱟試劑(rCR)較重組C因子(rFC)具有以下優(yōu)勢:
基因重組鱟試劑 | 動態(tài)濁度法鱟試劑 | 動態(tài)顯色法鱟試劑 | 凝膠法鱟試劑 | 凝膠法快速檢測試劑 |